Durante el semestre de enero a mayo, pude afrontar varios retos y aprender mucho de ellos. Dado a que la lignina es un producto de biomasa, se ha incurrido en varios problemas. Entre ellos conseguir una fase móvil que lograra la separación de lignina con agua en el HPLC. Hay que tener en consideración que la lignina es un polímero el cual tendría como resultado varios picos en el HPLC, que cuando analizaba las corridas, consideraba que debería de ser un solo pico, lo cual estaba equivocado. Para alcanzar dicha separación, se debería de conseguir una fase móvil valida. Utilizando como referencia pasados experimentos, se consiguió que una mezcla de acido fosfórico:Metanol:Acetonitrilo en una mezcla de 4:3:3 era idónea para separar la lignina en el HPLC . Dado a la fuerte concentración de acidez del acido fosfórico, que podría ser fatal para pasar por el HPLC, se sustituyo por otras mezclas. Se comenzó utilizando una mezcla de 40:30:30 de metanol, acetonitrilo, agua, pero no se pudo conseguir la separación necesaria, solo se determino un pico el cual podría confundirse con contaminación o con el pico de inyección dado a que se obtuvo muy rápido en el espectro. Luego se cambio de solución a una de agua y acetonitrilo a 30:70, con 0.2% de acido acético y 0.2% de trietilamina. En el momento considere que esa última mezcla no separaba la solución de lignina y agua y que necesitaba más agua en la misma, y comencé a añadirle agua a la fase móvil, y lo que hizo fue juntar los diferentes picos del polímero y lograr solo uno con otras contaminaciones. Aprendí a como utilizar el equipo correctamente, desde cambiar la fase móvil, evitar la entrada de burbujas al mismo, utilizar el software en la computadora e inyectar la muestra.
Otro contratiempo es que la lignina por lo regular no es soluble en agua, por lo que se mantuvo la solución por un tiempo razonable en constante agitación, utilizando un agitador magnético. Además para evitar que la muestra se degradara, se colocaba en un refrigerador mientras no estaba en uso. Se tenía que tratar con precaución para evitar contaminación de la misma.
Para el próximo semestre se tomaran en cuenta los contratiempos y lo aprendido este semestre para continuar con las muestras. Se comenzara buscando una solución móvil que sea idónea para lograr separación, además hacer los arreglos para ver si se obtiene algo de los otros componentes de lignocelulosa que son la hemicelulosa y la celulosa, dado que mi proyecto es en si con la lignocelulosa. Dado a que la lignocelulosa es una mezcla de componentes se están realizando estos análisis con sus respectivos componentes. Espero que el semestre que viene brinde mejores resultados.
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